COMMON PROBLEM
常見(jiàn)問(wèn)題
非洲豬瘟熒光定量PCR檢測出假陽(yáng)性怎么辦？
主要原因是：實(shí)驗室被污染、樣本或者氣泡干擾、電壓不穩導致的基線(xiàn)不穩定。非洲豬瘟病毒感染是血液和組織中病毒載量非常高，經(jīng)常檢測到CT值為15左右的樣本。樣本處理和提取的過(guò)程中需要進(jìn)行離心操作，這樣高濃度的樣本離心時(shí)容易造成氣溶膠污染。解決方法：加強人員培訓，養成良好的實(shí)驗習慣，建立有效的溝通和激勵機制，熒光定量PCR實(shí)驗室分試劑配制區、樣本處理區、核酸擴增區、嚴格分區管理，不同區域的移液器用不同的標識區分，防止混用。
PCR儀運行中突然斷電怎么辦？
一般我們建議在實(shí)驗室配置USP電源，這樣能夠保證PCR儀器在運行過(guò)程中能夠正常的供電，從而保證程序的正常運行。PCR儀在運行中突然斷電的話(huà)，如果儀器有斷電保護功能，則可直接繼續運行程序。如沒(méi)有USP電源，突然斷電而導致PCR程序不能完成，為了保證實(shí)驗結果的真實(shí)性，建議只能重復實(shí)驗再上機檢測。
磁珠結團怎么辦？
結團原因：1、由磁珠本身特性所以造成，2、由磁珠所處試劑環(huán)境所造成。3、磁珠表面吸附了大量核酸。4、雜質(zhì)太多
解決方法：修改試劑配方，優(yōu)化試劑配制去除雜質(zhì)。
解決方法：修改試劑配方，優(yōu)化試劑配制去除雜質(zhì)。
核酸得率低
裂解環(huán)節出現問(wèn)題（主要是結合的時(shí)候磁珠不團結）
洗脫環(huán)節出現問(wèn)題（主要表現為結團的磁珠未被打散）
解決方法：1、更換洗脫液且嚴格按照SOP操作流程
2、加大力度震蕩磁珠或用吸頭吹吸、攪拌。
2、加大力度震蕩磁珠或用吸頭吹吸、攪拌。
核酸純度低
A260/A280要在1.7-2.0之間，低于1.7則存在蛋白污染，高于2.0存在RNA污染這時(shí)需對裂解環(huán)節進(jìn)行優(yōu)化。A260/A230小于1.5，則認為存在污染考慮是鹽類(lèi)污染，需對洗滌環(huán)節進(jìn)行優(yōu)化。還有可能是醇類(lèi)污染，需對晾干時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化。
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